《生物化学》实验教学大纲

《生物化学》实验教学大纲

（供临床医学专业本科用）

生物化学是研究生物体的化学组成及其在整个生命过程中化学变化规律的一
门科学，其主要任务是应用化学、生物学的基本知识来阐明生物体的化学组成、
物质代谢及其调控规律。生物化学是基础医学和临床医学的基础，实验是这门学
科的重要研究手段。生物化学实验教学的目的是通过实验加深对理论的理解，学
习掌握基本的生化实验技能和方法，为今后的学习和研究打下一定的基础。同
时，培养锻炼学生科学的思维方法，实事求是的科学态度和严格的科学作风，提
高分析问题和解决问题的能力。生物化学实验教学过程中由教师重点讲解实验的
基本原理、技能方法和实验要求，学生在教师的指导下独立完成实验操作全过
程，并对实验结果进行适当的处理和分析讨论，完成实验报告。

实验一   生化实验的基本操作

[教学要求]

⒈掌握：玻璃仪器的洗涤、刻度吸量管的使用、溶液的混匀、离心机的使用
等基本操作。

⒉了解：定量移液器的使用。

[教学内容]

教师讲解：

1.玻璃仪器的常用洗涤方法、刻度吸量管的正确使用方法及注意事项、溶液
的几种混匀方法、离心机的正确使用方法。

2.制备无蛋白质血滤液的基本方法、原理、临床意义和仪器药品使用注意事
项、实验室及个人安全。

学生操作

1.洗涤、烘干试管和离心管

2.按要求配制试剂，正确使用刻度离心管

3.正确使用离心机

4.转移上清液

[教学方法]

⒈讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验二   缓冲溶液的配制及性质

[教学要求]

⒈掌握：缓冲溶液配制的原理和方法及其抗酸、抗碱作用；

⒉熟悉：缓冲溶液的抗稀释作用；

⒊了解：缓冲溶液抗酸、抗碱、抗稀释作用的原理。

[教学内容]

教师讲解：缓冲溶液配制的原理和方法，其抗酸、抗碱、抗稀释作用及其原
理，实验技术操作要点，药品使用注意事项。

学生操作

1.缓冲溶液的配制

2.缓冲溶液的稀释

3.缓冲溶液的抗酸、抗碱作用

[教学方法]

⒈讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验三   蛋白质的性质实验

[教学要求]

⒈掌握：蛋白质的等电点的概念、测定方法及其原理

⒉熟悉：蛋白质几种沉淀反应、原理及其区别

⒊了解：蛋白质的呈色反应及其原理

[教学内容]

教师讲解：蛋白质的呈色反应、沉淀反应、等电点等性质的原理及其应用，
技术操作要点。

学生操作

1.茚三酮反应

2.沉淀反应—盐析、重金属盐沉淀、三氯乙酸沉淀

3.蛋白质等电点的测定

[教学方法]

⒈讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验四   比色分析法及7220型分光光度计的原理和使用

[教学要求]

⒈掌握：Lambert—Beer定律；比色分析法（包括公式法和标准曲线法）；
7220型分光光度计的正确使用方法。

⒉熟悉：绘制无机磷标准曲线的原理和操作

⒊了解：分光光度计的的原理构造

[教学内容]

教师讲解：Lambert—Beer定律、比色分析法（包括公式法和标准曲线法）、
分光光度计的的原理构造

教师示教：7220型分光光度计的正确使用方法及维护

学生操作

1.按要求配制试剂

2.应用7220型分光光度计测定各管的光密度

3.绘制无机磷标准曲线

[教学方法]

1.讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

2.示教7220型分光光度计的正确使用方法及维护

3.学生独立操作。

4.总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验五   血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳

[教学要求]

⒈掌握：蛋白电泳技术及其原理

⒉熟悉：血清蛋白正常百分含量

⒊了解：不同介质中进行的蛋白电泳及其区别应用

[教学内容]

教师讲解：蛋白电泳的原理、应用及其意义；不同介质中进行的蛋白电泳及
其区别应用；电泳技术操作要点。

学生操作

1.点样

2.通电

3.染色

4.漂洗

5.脱色

6.测定各管光密度

[教学方法]

1.讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

2.学生独立操作。

3.计算血清中各种蛋白的百分含量。

4.总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验六   血中葡萄糖含量的测定

（邻甲苯胺法）

[教学要求]

⒈掌握：用邻甲苯胺法测定血中葡萄糖含量及其原理

⒉熟悉：血糖的正常值（包括不同方法测得的正常值）

⒊了解：影响血糖测定的因素

[教学内容]

教师讲解：邻甲苯胺法测定血中葡萄糖含量的原理和方法；各种方法测得的
血糖正常值；影响血糖测定的因素；技术操作要点；仪器药品使用注意事项。

学生操作

1.按要求配制试剂

2.沸水浴加热

3.冷水浴终止反应

4.测定各管光密度

 [教学方法]

1.讲解实验基本原理、技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个
人安全。

2.学生独立操作。

3.计算血清中葡萄糖的含量

4.总结并评价实验结果，分析实验误差，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验七  血清谷丙转氨酶的测定

[教学要求]

掌握：血清谷丙转氨酶的活性测定方法

熟悉：血清谷丙转氨酶测定的正常值范围

了解：7220型分光光度计的使用方法

[教学内容]

教师讲解：我们可以运用产物的生成量来间接的表示酶的活性，通过测定丙
酮酸的生成量，通过1ml血清于37度与底物作用30分钟，产生2.5ug丙酮酸为一个谷
丙转氨酶活性单位

学生操作：

1.取出4支试管，各加入相应试剂，并置于37度水浴中保温

2.用520nm单色光，蒸馏水调零，测定各管的光密度值

3.读取各管的光密度值，通过计算公式得出血清谷丙转氨酶的数值

 [教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验八  血清总钙的测定

[教学要求]

掌握：血清中钙的正常值范围

熟悉：用比色分析法对血清钙的含量测定

了解：7220型分光光度计的使用方法

[教学内容]

教师讲解：血清中的钙离子在碱性溶液中与生色试验反应产生颜色后可以通
过比色分析法测得其含量

学生操作：

1.取3支试管，分别加入相应试剂

2.各管混匀后用610nm波长，10mm比色杯，空白管调零，进行比色分析

3.读取各管的光密度值，通过公式计算测的血清钙的数值

 [教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安
全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验九  酶的专一性

[教学要求]

掌握：酶的高度专一性对反应的影响

熟悉：通过实验验证酶的专一性

[教学内容]

教师讲解

酶具有高度的专一性，它只对特异的底物有催化作用或者对同一底物的同分
异构体有催化作用，通过本次实验可以得到验证

学生操作

1.稀释唾液的制备

2.煮沸唾液的制备

3.取3支试管，加入相应试剂

4.37度水浴中恒温10分钟，各管加入班氏试剂，沸水浴煮沸，观察结果

[教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安
全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十  影响酶活性的因素

[教学要求]

掌握：温度、PH、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响

熟悉：影响酶促反应速度的六大因素

了解：淀粉中的淀粉酶所受的影响因素

[教学内容]

教师讲解

淀粉可以被淀粉酶水解，在不同的温度、酸碱度下，淀粉酶的活性不同，淀
粉的水解程度也不同，另外，激活剂与抑制剂也对淀粉酶有影响作用

学生操作

1.温度对酶促反应速度的影响实验操作

2.PH值对酶促反应速度的影响实验操作

3.激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响实验操作

 [教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安
全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十一   琥珀酸脱氢酶的作用及其抑制

[教学要求]

掌握：琥珀酸脱氢酶的催化作用及反应过程

熟悉：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

了解：酶活性测定的方法

[教学内容]

教师讲解：琥珀酸脱氢酶的催化反应过程，讲述丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞
争性抑制作用，及其测定方法

学生操作

1.取鼠大腿肌肉或肝制备组织匀浆

2.取出4只试管，加入相应试剂，并加入液体石蜡与溶液表面，37度水浴中恒温

3.15分钟内观察比较各管颜色改变，并记录

 [教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十二     肝中酮体生成作用

[教学目的与要求]

掌握：酮体是在肝脏中合成，肝脏外利用的。

熟悉：酮体合成的过程。

了解：组织匀浆的制备方法。

[教学内容]

教师讲解：酮体合成的部位、方式、所需的酶，酮体氧化分解的部位、方式、所
需的酶，以及简要介绍组织匀浆的制备方法。

学生操作

1.肝匀浆和肌匀浆的制备

2.取出4只试管，加入相应试剂，并将其置于37度水浴中恒温

3.各管中加入三氯醋酸，并离心

4.加入显色粉，观察记录颜色反应

[教学方法]

⒈讲解实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

⒉学生独立操作。

⒊总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十三  质粒DNA的提取及电泳鉴定(综合性)

[教学目的与要求]

掌握：酶切和电泳鉴定的基本操作技术

熟悉：质粒DNA的提取方法

了解：基因工程的简单原理

[教学内容]

教师讲解：质粒的概念、意义，染色体DNA和质粒DNA的差异，碱性SDS法提取
DNA的原理，限制性内切酶的概念，EcoRⅠ的识别序列与切割位点，琼脂糖凝胶
电泳分离核算片段的原理。

学生操作

1.质粒提取

2.酶切

3.电泳鉴定

4.结果处理

[教学方法]

1.      实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

2.      学生独立操作。

3.      总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十四   碱性磷酸酶Km值测定

[教学要求]

掌握：底物浓度对酶促反应速度的影响

熟悉：米曼方程、Km值的意义及双倒数作图求Km值的方法

了解：Km值测定的其它方法

[教学内容]

教师讲解：底物浓度对酶促反应速度的影响，米曼方程及Km值的意义，以碱性磷
酸酶为样品测定Km值的原理。

学生操作

1 .取干净大试管9支编号，加入相应试剂，混匀后在37℃准确保温15分钟。

2 .保温结束，立即加入0.5 mol/L NaOH以终止反应。

3 .各管中分别加入显色试剂，以空白管调零，于波长510 nm处比色测定，并计
算各管酶活性。

4        .以酶活性单位（V）的倒数1/V为纵坐标，以底物浓度[S]的倒数为横坐
标，在坐标纸上作图，求该酶的Km值。

[教学方法]

1.      实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

2.      学生独立操作。

3.      总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十五  SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(综合性)

[教学要求]

掌握：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的工作原理

熟悉：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的操作技术

了解：分离蛋白质的方法

[教学内容]

教师讲解：不同的蛋白质具有不同的相对分子量，并在一定的pH溶液中带有不同
的电荷。但经过阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）处理后的蛋白质，分子表面
完全被负电荷所覆盖，因此在电泳时，电泳迁移率取决于蛋白质的相对分子量大
小而与其所带电荷性质无关。

学生操作：

1.菌体的获得

2.配置分离胶

3.配制4%浓缩胶

4.样品的制备

5.电泳

[教学方法]

1.实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

2.学生独立操作。

3.总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩。

实验十六  PCR基因扩增(综合性)

[教学要求]

掌握：多聚酶连式反应（PCR）反应的基本原理

熟悉：PCR反应的实验技术

了解：PCR反应在临床中的意义

[教学内容]

教师讲解：PCR反应的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两
侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，
DNA扩增2ⁿ倍。典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、
dNTP、MgCl_2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。

学生操作

1．在0.5 mL Eppendorf管内配制25 mL反应体系

2．按照扩增程序进行扩增

3．琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果

4．紫外灯下观察结果

[教学方法]

1.      实验基本技术操作要点、仪器药品使用注意事项、实验室及个人安全。

2.      学生独立操作。

3.      总结并评价实验结果，完成实验报告，并计作平时成绩

参考书：

《生物化学实验指导》     甘中教材204号，第一版，2002 .2

《生物化学实验指导》     甘中教材204号，第二版，2005.8

《分子医学技术》         科学出版社，第一版，2000.9

《基因工程实验技术》     湖南科学技术出版社，第二版，1998.5